超声波破碎细胞的注意事项
添加日期：2013年08月14日 关键字：超声波破碎仪 点击次数：2839 次
导读：
1.在大肠杆菌表达外源蛋白试验中，使用超声波破碎仪破碎的注意事项：
1）会产生气泡是因为你的探头位置没放好。探头一定要接近底部，约1cm（我一般是距底部0.5mm）。功率根据仪器不同会有所不同，但你可以观察液面，有波动但不要太剧烈就好。
2）破3S停10S，破二十至三十才查看一下效果。
3）尝试超8s停8s，对有些菌体蛋白来说，你的方法很难散热，导致蛋白变性产生气泡，最好停顿时间稍长一些，这种情况多见于包涵体形式的蛋白。
（1）取细菌的24 h培养液于5 000 r／min 下离心5 min收集菌体．
（2）用pH 7．5的Na2HPO -NaH2PO 缓冲液洗涤3次，再用该缓冲液将菌体配成1：3的菌悬液．置于40mL大塑料试管内．
（3）将大塑料试管置于冰浴中，采用超声波破碎（功率200 W，1／2”探头，破碎30 s，间歇30 S）．
（4）破碎液于12 000 r／min下高速冷冻离心30 min，收集细胞碎片和上清夜．
超声破菌流程与上述基本一致，就是洗涤菌体也可以用预冷的生理盐水或pH8的Tris－HCl，洗涤一次就可以。另外，超声剂量随样品量、菌体改变比较大，功率可以到400－600w，超5s，停5s，冰浴，要加终浓度1 mM的PMSF。为确定合适的超声强度和次数，有必要随时镜检观察菌体是否完全破碎。
放线菌属于原核生物系统进化树上的（G＋C）摩尔百分含量（mol％）高的革兰氏阳性菌（Eubacteria）分枝类群，它虽然具有原核生物特有的分子生物学特性，但在其不同类群中，细胞壁的化学组分变化很大.
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